在發酵過程中,培養基滅菌主要有以下幾個原因:如不滅菌,會使生物反應
的基質或產物,因雜菌的消耗而損失,造成生產能力的下降;雜菌也會產生代謝
產物,這就使產物的提取更加困難,造成得率降低,產品質量下降;雜菌大量繁
殖后,會改變反應液的 pH 值,使反應異常;有些雜菌會分解產物,使生產失敗;
如果發生噬菌體污染,生產菌細胞將被裂解,使生產失敗。怎樣進行培養基滅菌?
濕熱滅菌
培養基滅菌大多數用濕熱滅菌。衡量熱滅菌的指標很多,zui常用的是“熱死
時間”,即在限定的溫度下殺死原有微生物中一定比例所需的持續時間。影響熱
滅菌的溫度和時間的因素很多,包括:微生物種類、性質、濃度和培養基的性質、
濃度等。
(1)連續滅菌
連續滅菌也叫連消,其溫度一般以 126~132 ℃為宜,總蒸汽壓力要求達到
0.044~0.049 MPa 以上。培養基采用連續滅菌時,需在培養基進入發酵罐前,
直接用蒸汽進行空罐滅菌(空消),用無菌空氣保壓,待培養基流入罐后,開始冷
卻。滅菌時對培養基的加熱可采用各種加熱器。培養基的冷卻方式有噴淋冷卻式、
真空冷卻式、薄板換熱器式幾種方式,其過程均包括加熱、維持和冷卻。
(2)間歇滅菌
間歇滅菌即實消,是在每批培養基全部流入發酵罐后,就在罐內通入蒸汽加
熱至滅菌溫度,維持一定時間,再冷卻到接種溫度。實罐滅菌時,發酵罐與培養
基一起滅菌。
其他滅菌設備一般采用蒸汽滅菌,如設備十分耐壓,則可采用較高的溫度,
但必須注意設備內部的凹處及露出的小配管等蒸汽不能到達的部位。
高壓蒸汽滅菌
高壓蒸汽滅菌適合于耐高溫培養基、接種器械和蒸餾水的滅菌。培養基在制
備過程中混入各種雜菌,分裝后應立即滅菌,至少應在 24h 內完成滅菌工作。滅
菌時一般是在 0.105MPa 壓力下,溫度 121℃時,滅菌 15~30min 即可。消毒時間
不宜過長,也不能超過規定的壓力范圍,否則有機物質特別是維生素類物質就會
在高溫下分解,失去營養作用,也會使培養基變質、變色,甚至難以凝固
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