人SV40轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞HFOB1.19性能參數(shù)科研

在進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)的時候，胰蛋白酶作用的時間是在1～3分鐘，由于我有好幾個培養(yǎng)瓶（4個以上）的細(xì)胞都需要進(jìn)行傳代操作，那么就胰酶消化這一步而言，我是該一個培養(yǎng)瓶一個培養(yǎng)瓶這么分開做，還是可以幾個同時做呢？同時做我怕后來操作的培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞消化過度?。∫粋€一個的做會不會又太費(fèi)時呢？

培養(yǎng)基 D-MEM/F-12培養(yǎng)基(GIBCO,貨號12400024，添加L-glutamine 150mg/L, NaHCO3 1.5g/L)，90%；0.3mg/ml G418；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：33.5攝氏度。
生長特性 貼壁生長

1、一個一個做！防止污染，和消化細(xì)胞時間的不均勻。

2、原則上，為了避免細(xì)胞系之間的污染，應(yīng)該一個一個的做。但是如果你能保證無菌操作的原則，人SV40轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞HFOB1.19性能參數(shù)科研也能把握好各種貼壁細(xì)胞系消化的時間，是可以同時做，這樣效率高。建議你剛開始一個一個的做，熟練以后根據(jù)具體情況決定如何做。

3、4個可以同時做，時間到了用移液槍給4個瓶加含血清的培養(yǎng)基終止就行。

4、新手的話強(qiáng)烈建議一個一個處理細(xì)胞，特別是消化，除非你養(yǎng)的細(xì)胞對消化都不敏感，不然很容易消化過度或者不到位。另外同時處理多個細(xì)胞容易出現(xiàn)細(xì)胞間交叉污染，一旦污染基本沒救，比細(xì)菌污染還要麻煩。

5、剛開始還是一個一個來，人SV40轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞HFOB1.19性能參數(shù)科研消化的時間與細(xì)胞的來源有很大關(guān)系，貼壁性強(qiáng)的細(xì)胞，需要消化的時間較長。一般除了貼壁性強(qiáng)的癌細(xì)胞外，細(xì)胞消化時間1-3min，還有胰蛋白酶的濃度有關(guān)系，濃度高的消化時間要短一些，不然會消化過了，對于細(xì)胞的生長不好。你可以在分散打入胰蛋白酶時，輕晃培養(yǎng)瓶，在顯微鏡下看見細(xì)胞開始變亮，皺縮，卷邊的時候就加入培養(yǎng)液或者血清終止消化。

失敗的關(guān)鍵原因還是細(xì)胞復(fù)蘇的時候沒有迅速解凍的緣故，后一次成功是因為注意到這個問題。細(xì)胞的復(fù)蘇及凍存遵循慢凍速融原則，如果hFOB 1.19人SV40轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞取出后沒有在盡可能短的時間里解凍的話細(xì)胞內(nèi)部會產(chǎn)生很多冰晶對細(xì)胞就有致命的損失了。另外，細(xì)胞的確應(yīng)該是在液氮條件下保存，如果液氮可以保存1-2年的細(xì)胞，放-80度保存恐怕不到三個月就不行了，并且狀態(tài)會很差。ZYC3821    神經(jīng)前體細(xì)胞培養(yǎng)基    NPrCM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3822     神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)基    NM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3823     少突膠質(zhì)前體細(xì)胞培養(yǎng)基    OPCM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3824     球狀少突細(xì)胞培養(yǎng)基    OsM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3825     角質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基    KM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3826     角質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基（確定）     KM-d    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3827    成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基    FM-sf    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3828    扁桃體上皮細(xì)胞培養(yǎng)基    TEpiCM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3829     口腔角質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基    OKM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3830    結(jié)腸上皮細(xì)胞培養(yǎng)基    CoEpiCM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3831     支氣管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基    BEpiCM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 

人SV40轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞HFOB1.19性能參數(shù)科研

使用權(quán)限 A類注意事項：
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)過夜，隔天再取出觀察。此時多數(shù)細(xì)胞均會貼壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請用臺盼藍(lán)染色測定細(xì)胞活力，如果證實細(xì)胞活力正常，請將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活力，請拍下照片及時和我們，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次。
4. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細(xì)胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件;建議直接購買提供的*培養(yǎng)基。
5. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通交流。
培養(yǎng)溫馨提示：
1）公司努力實現(xiàn)為科學(xué)研究提供實驗細(xì)胞技術(shù)服務(wù)。所提供的實驗細(xì)胞及其子代，不能用于人體實驗和臨床診斷、治療。
2）公司細(xì)胞資源中心承諾盡zui大努力對實驗細(xì)胞資源相關(guān)信息進(jìn)行及時更新。但限于我們的技術(shù)條件，中心不保證其準(zhǔn)確性。
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注意事項：
1. 收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。